联系方式:400-990-3999 / 邮箱:sales@xiyashiji.com
西亚试剂 —— 品质可靠,值得信赖
少数机构已经认识到了交叉污染的问题,如ATCC(7)和FDA,这些机构要求对用于制药领域的实验中所使用的材料 - 诸如细胞系 - 应该进行"身份鉴定"和纯度测试(8)。Nature杂志最近也要求报告新的人类胚胎干细胞系的文章提供STR指纹图谱数据,但没有对其它细胞系进行要求(4)。虽然一些杂志和基金组织认识到了细胞系被错误辨识的问题,但是他们还不确定如何能够最好地解决这些问题。应该在什么时候要求研究人员确认细胞系身份,是在审核前还是审核后?用于证实作者的细胞系身份的参照资源从哪里来?
细胞系被错误辨识不仅会浪费时间和金钱、导致结果前后不一或不可重复、或文献被退回,还可能对人类健康产生潜在的威胁。药物、疫苗和其它生物药物都是以实验室的研究发现为基础而产生的,往往都是跟细胞培养相关。基于误导性的或虚假的数据而制造的药物产品将会导致该药品全面投产的延迟,同时还推迟了针对多种疾病的有效治疗手段的推出。研发治疗手段的时间越长,遭受疾病困扰的人数就越多。
基于STR的方法可以轻松、快速地鉴定细胞身份
所有这些问题都可以通过价格低廉的方法来解决,这一方法目前被用于鉴定细胞系的标准程序,但是这一鉴定过程必须要进行。 Roderick MacLeod 及其同事在DSMZ发现约有90%的科学家在提交新细胞系时,忽视或拒绝细胞库的要求,他们抵触建立细胞系DNA指纹图谱以备将来鉴定细胞系使用(5,7)。研究人员需要在他们从事研究的早期就接受教育,知道如何检测种系内和种系间的交叉污染,并了解为什么这样做会如此重要。
在细胞培养中可以使用许多方法对交叉污染进行鉴定,如同功酶分析、染色体组分型、人淋巴细胞抗原(HLA)分型和扩增片段长度多态性(AFLP)的特征分析。但是,比较好的方法是STR图谱法,此方法是在以DNA为基础的法医鉴定领域成功建立起来的。在ATCC,STR分析使用的是多重PCR(Promega PowerPlex®1.2系统),可以同时扩增8个STR位点加1个性别决定位点Amelogenin(10,11)。每个被分析的人源细胞系都有其独特的DNA重复模式,因此通过与基础图谱进行比对,即可对每一批新细胞系的身份进行确证。STR方法防止了ATCC将其6个"错误"细胞系进一步传播出去 - 因为经过STR分型后,发现原本来自女性的细胞系中存在着Y染色体特异的扩增产物。此研究团体希望STR图谱技术能够作为全球范围的检测并消除细胞系污染的参考技术。
Cell ID™系统能够为您提供基于STR的细胞系身份认证
Promega公司是STR分型系统的主要供应商,在法医和亲子鉴定方面具有领先优势,其PowerPlex®1.2 STR分析系统(PowerPlex® 1.2 STR analysis system)已经成为细胞培养机构进行细胞系鉴定的"金标准"。为了满足使用更简便地进行细胞系鉴定的需要,我们研发了Cell ID™系统(Cell ID™ System a,b),并对此系统进行了改进,提供了能够成功而简便地鉴定、鉴别人源细胞系和检测种系内细胞系交叉污染的试剂。
Cell ID™系统使用STR分型技术,同时扩增特异性强、具有高度多态性的10个位点(9个STR位点和性别识别位点Amelogenin;包括D21S11,TH01,TPOX,vWA,Amelogenin,CSF1PO,D16S539,D7S820,D13S317和D5S818),三色荧光标记。这些位点组合所提供的遗传图谱的随机匹配概率为29.2亿分之一。 该系统包括一个热启动的Taq DNA聚合酶,可以方便地在室温条件下组装反应组分。 扩增后,采用单次注射毛细管电泳对样本进行分析,同时结合使用所提供的标准品,用以帮助确定不同位点的等位基因的大小(图2)。使用等位基因分析软件确定遗传图谱。
即使大多数科研人员所在的实验室没有进行STR分型的设备,他们仍可通过具备仪器(毛细管电泳)、软件和经验的研究所中心实验室和专业服务公司来完成STR分型。 文献中,通常建议研究人员在培养细胞的较早阶段(细胞培养第一周)来鉴定细胞系的身份。细胞在被冻存前应再一次进行鉴定;对于活跃生长的细胞,每两个月应鉴定一次;文献发表前也应对细胞系身份进行鉴定。如果一个实验室使用不止一种细胞系,则应在实验最开始时,就要对所有的细胞系进行鉴定,以便排除交叉污染(8)。
总结
由于细胞培养体系在生物药物的研究和技术发展中非常重要,适当的细胞系鉴定过程即成为每个研究人员的最大兴趣点。然而,交叉污染的问题仍然存在。随着世界范围内实验室使用新细胞系的数量增多和频率增加,在质量控制(如:细胞系鉴定)的基本原则上产生了巨大的差别。从已经发表的、使用"错误"的细胞系而导致可疑性结果的研究论文,到用于临床的干细胞系和其它细胞系,交叉污染影响到了科学研究的每个领域-从实验台到临床。如果在细胞培养的处理和操作中不进行重大变革,那么交叉污染将会成为一个更大、更严重的问题。