右旋糖酐40制法/工艺

生物发酵法
菌种选育菌种肠膜状明串珠菌(Leyconostoc meseteroides)。培养基的配制：按质量/体积的配比，将蔗糖10%，蛋白胨0.25%，磷酸氢二钠0.08%，加水至100%，煮沸溶解，滤纸过滤，取滤液3ml分装于试管中，用纱布棉花塞紧，置网格中，117.72kPa(1.2kgf/cm2) 120℃加压灭菌30min，放冷，至恒温箱中，得澄清透明液体培养基供接种用。按上述液体培养基配比，加琼脂1.5%-2%，煮沸溶解，取5ml分装于试管中，用纱布棉花塞紧，117.72 kPa (1.2kgf/cm2)，加压灭菌30min，冷却，即为固体培养基。
菌种纯化和培养取固体培养基5支，加热熔化后，置50-60℃水浴上保温，并分别编号。在无菌橱内选取菌种试管，用白金耳蘸取一耳接种于装有固体培养基的1号试管中，摇匀，再蘸取1号试管接种于2号试管中，摇匀，依次接种至5号试管。然后趁热(约50℃)逐管倾入对应编号的培养皿中，放平，冷却，倒放于恒温箱中，25℃恒温培养24h，培养皿板上出现圆形、边缘整齐、中间微凸、透明、发黏菌落。在第3-5号培养皿内选菌种，正常菌落数应以5-20个为准。用蜡笔在培养皿外壁划圈，选定典型菌落(特征明显，大小适宜)。在无菌橱内以白金耳蘸取圈定的菌落接种于装有液体培养基的试管中，25℃培养24h。传2-3代后，进行小样发酵、水解、划分等试验，选取收率高，成分好，产量高的菌种，2-4℃冰箱保存，备扩大生产使用。
肠膜状明串珠菌[培养基]→[25℃，24h]菌落
种子培养取液体培养基400ml(中瓶)及4000ml(大瓶)，一支菌种试管(3ml)接种于中瓶中，再将中瓶中培养好的种液约100ml接种于大瓶中。在25℃培养20-24h，终点pH3.8-4.3，发酵良好者可供生产使用。
菌落[液体培养基]→[25℃, 20-24h]种子培养液
发酵、沉淀按蔗糖15%，蛋白胨0.25%，磷酸氢二钠0.15%，加常水至100%，制成发酵培养基盛于发酵罐中，接种量2.5%，搅拌10-15min，控制pH7-7.4，25℃左右，发酵20-24h，最后发酵液pH在4.2-5，达终点。加85%±5%的乙醇沉淀，再用60%-70%乙醇洗涤沉淀，得水解用的高分子右旋糖酐粗品，收率85%。
种子培养液[发酵培养基]→[25℃，20-24h, pH7-7.4]发酵液[85%乙醇，60%-70%乙醇]→[pH4.2-5]高分子右旋糖酐粗品
水解、中和、纯化将高分子右旋糖酐粗品加蒸馏水加热溶解，按水解液质量计算，加盐酸0.1%，保温95-100℃，水解，补加蒸馏水稀释浓度达11%，控制终点粘度2.7-2.9，以6mol/LNaOH缓慢中和至pH6-6.5，加无水氯化钙2.4 g/L (0.24%)，最后加入766型粗粒活性炭8 g/L(0.8%)，在搅拌下进行脱色，过滤，得供划分用的水解液。
粗品[HCl, NaOH, CaCl2, 766活性炭]→[95-100℃, pH6-6.5]划分用水解液
一级划分取水解液加入乙醇，使其浓度为40%-40.5%，在40℃保温22h后，收集上层清液，共二级划分，沉淀物为杂质及大分子右旋糖酐。
二级划分一级划分后的上清液加入乙醇，使其浓度达45%-45.5%，搅拌15min，40℃保温静置22h，沉淀物为中分子右旋糖酐。
三级划分二级划分后的上清液加入乙醇，使其浓度达48%-48.5%，搅拌15min，40℃保温静置22h，沉淀为低分子右旋糖酐。
四级划分三级划分后的上清液加入乙醇，使其浓度达55.5%一56.5%，搅拌15min，常温静置6h，沉淀为小分子右旋糖酐。
$S001$S
$S002$S
干燥划分所得右旋糖酐，用90%以上的乙醇调粉脱水和除去杂质，制成松散的含醇粉末，经离心，烘干，得右旋糖酐成品，总收率60%。
右旋糖酐成品[90%以上乙醇]→含醇粉末[离心，烘干]→右旋糖酐成品
注射剂的制备将右旋糖酐成品分别与葡萄糖或氯化钠按注射剂要求制成灭菌水溶液。
右旋糖酝成品[葡萄糖，水]→葡萄糖注射液
右旋糖酐成品[氯化钠，水]→[灭菌]氯化钠注射液。以上资料由西亚试剂：化学品数据库