乙酰氨基苯酚和水杨酰胺分光光度法

    〔在对组胺、马比妥酸、咖啡碱、抗坏血酸、脱氢可的松及颠茄生物碱存在下适用。但阿斯区灵干扰水杨酰胺的测定〕 
A 仪器
 A.a 色谱柱
    简单的，250×25mm内径。 
A.b 填充棒
A.c 紫外分光光度计
    最好为记录型，带1.0cm吸收池。 
A.d 红外分光光度计
    带制备KBr压片的设备。 
B 试剂
B.a 磷酸三钾
    20%。溶解10.0g K3PO4于水中，并稀释至50ml。 
B.b 水洗过的氯仿
    将等体积的CHCl3和H2O置于分离器中振荡1min。当天使用。 
B.c 水洗过的乙酸乙酯
    将等体积的EtOAc和H2O置于分离器中振荡1min，弃去下层的水相。 
B.d 乙酸氯仿溶液
B.d.1 10%
    用CHCl3将10ml HOAc稀释至100ml； 
B.d.2 1%
    用CHCl3将10ml 10%的乙酸氯仿溶液稀释至100ml。每个样品制备约375ml，标准溶液制备225ml。 
B.e 硅藻土
B.f 乙酰氨基苯酚标准溶液
    0.6mg/100ml。准确称取约60mg USP参比标准乙酰氨基苯酚，放入100ml容量瓶中，用乙醇溶解并稀释至100ml。继之用乙醇稀释10ml此溶液至100ml。接着用乙醇再稀释10ml第二次稀释液至100ml。 
B.g 水杨酰胺标准溶液
    2mg/100ml。准确称取约50mgUSP参比标准水杨酰胺；放入100ml容量瓶中，用1%HOAc-CHCl3溶解并稀释定容。再用1%HOAc-CHCl3稀释4ml此溶液至100ml。 
C 样品的制备
测定片剂或胶囊的平均重量，将其压成粉末，并过60目筛。 
D 柱的制备
D.1 柱Ⅰ
    置小片玻璃毛于色谱柱中。将1.0g硅藻土，(e)，与0.5ml HCl(1+1)放入烧杯中充分混合直至松散为止，然后将其装填于柱内。准确称取约含50mg乙酰氨基苯酚的粉末状样品至100ml烧杯中，用2.0ml HCl(1+1)将其完全润湿。加入3.0g硅藻土，充分混合，直至完全松散，然后将其定量地转移至色谱柱中，压紧。用1.0g硅藻土及0.5ml HCl(1+1)擦洗样品烧杯，擦洗物亦填入色谱柱中。用玻璃毛擦净全部器皿和样品烧杯，并将其紧压在柱的上部。 
D.2 柱Ⅱ置小片玻璃毛于色谱柱内。将3.0ml2%K3PO4与5.0g硅藻土充分混合直至完全松散，然后将其填入色谱柱，用少量玻璃毛覆盖硅藻土。 
E 测定
    将柱Ⅰ与柱Ⅱ接好，以便使柱Ⅰ的洗提液进入柱Ⅱ中。将一废液烧杯置于柱Ⅱ之下，加100ml水洗过的CHCl3至柱中，待CHCl3全部通过两柱后，将两柱分离。用5ml水洗过的CHCl3冲洗柱Ⅰ的柱颈，冲洗液放入柱Ⅱ。再用25ml水洗过的CHCl3淋洗柱Ⅱ。用CHCl3冲洗柱Ⅱ的柱颈，俟所有HCl3流尽，弃去CHCl3洗涤液。
在每一柱下放一只250ml容量瓶。用100ml水洗过的EtOAc由柱Ⅰ洗提乙酰氨基苯酚。在100ml EtOAc全部通过柱子之前，不要让柱子流干。用EtOAc〔不用水洗过的〕淋洗柱颈至容量瓶中。加入5ml乙醇，混匀。再用EtOAc〔不用水洗过的〕稀释至250ml。用移液管移取15ml至50ml容量瓶中，用EtOAc〔不用水洗过的〕稀释至50ml。再用移液管移取10ml此稀释液至100ml烧杯中，在缓慢的空气流中蒸发至干，不要加热。溶解残余物于乙醇中，并用几份乙醇定量地转移到100ml容量瓶中，再用乙醇稀释至100ml。用1.0cm吸收池，以乙醇作参比于248nm波长处测定样品和标准(f)溶液的吸光度A。如用自动记录分光光度计，用1.0cm吸收池，以乙醇作参比，从320至约210nm波长处进行扫描。
所取样品中乙酰氨基苯酚的毫克(mg)数＝83.33(A/A')×C
式中A和A'分别代表样品和标准溶液在248nm波长处的吸光度；C为参比标准溶液的准确浓度(mg/100ml)。
从柱Ⅱ洗提水杨酰胺，首先让10.0ml 10%HOAc-CHCl3通过柱子，接着通入100ml 1%HOAc-CHCl3。洗提完全后，用1%HOAc-CHCl3淋洗柱颈至容量瓶中，再用同一溶剂稀释至250ml。用移液管移取含约2mg水杨酰胺的溶液至100ml容量瓶中，用1%HOAc-CHCl3稀释至100ml。用1.0cm吸收池，以1%HOAc-CHCl3作参比，在308nm波长处测定样品溶液和标准(g)溶液的吸光度A。如果用自动记录分光光度计，则用1.0cm吸收池，以1%HOAc-CHCl3作参比，从370－260nm波长处进行扫描。所取样品中水杨酰胺的毫克(mg)数＝(250/B)×(A/A')×C
式中B为所取含2mg水杨酰胺等分溶液的体积(ml)；A和A'分别代表样品和标准参比溶液在308nm波长处的吸光度；C为参比标准溶液的准确浓度(mg/100ml)。 
F 鉴定
    用缓慢的空气流蒸发含约1mg每一组分的洗提液，然后制成每一组分的KBr压片。 在制备KBr压片之前，应肯定在水杨酰胺溶液中未出现HOAc的气味。
将每个成分的红外光谱[由2.0μm(5000cm^-1^)－15μm(660cm^-1^)]与标准的红外光谱进行对比。以上资料由西亚试剂：化学品数据库提供