西亚试剂：序列特异性的DNA结合结构域

大多数的工程核酸酶包括一个可定制的、序列特异性的DNA结合结构域，与一段非特异性的DNA核酸内切酶结构域熔合。虽然自然发生的归巢核酸内切酶或大范围核酸酶已被成功用于基因组工程，但是它们在hPSCs基因组编辑中的应用，一直都是非常有限的。成功用于hPSCs基因组编辑的第一个定制设计、位点特异性内切酶，是锌指核酸酶(ZFNs)。ZFNs的设计相对比较困难，它们的设计以及在实验室中的构建，在技术上仍然具有挑战性。

另一个定制设计的核酸内切酶是TALEN。像ZENs一样，TALENs包括一段定制的TALE DNA结合结构域，与非特异性的Fokl核酸酶结构域熔合。TALEN介导的hPSCs基因组编辑，已被用于产生hPSC基因报告细胞系、基因的双等位基因敲除以及点突变的修复和引入。

Cas9系统包含Cas9核酸酶和短的非编码CRISPR RNA序列，称为sgRNA。这些sgRNAs包含一段定制的20核苷酸序列，将共表达的Cas9核酸酶引导到sgRNA靶序列上，用以产生位点特异性的DSB。

在这项综述中，作者讨论了TALEN-和CRISPR/Cas9介导的基因组编辑程序用于hPSCs基因组编辑中，并可遵循一个通用的工作流程，并强调了所存在的问题、未预料到的困难和与之对应的解决方案。这篇综述文章中所描述的许多基因编辑方法，已经在其他类型的细胞中得以验证，但是只要有可能，就可以将它们应用于hPSCs。

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