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前期的研究表明Ziwi可以与piRNA相互作用,这提示我们Ziwi可能通过piRNA起作用的。Northern blot表明piRNA在卵巢和睾丸中均有较高程度的表达,并且Ziwi的表达和piRNA的表达呈现正相关。作者进一步对卵巢和睾丸的piRNA进行了高通量测序,发现卵巢和睾丸中的piRNA测序Reads具有较高的重叠。讲piRNA的测序reads比对到基因组中发现piRNA主要分布在转座子位置上。
图4 卵巢和睾丸的piRNA测序
图5 piRNA在基因组上的分布特征
通过对piRNA的质谱结构研究表明piRNA的5端具有磷酸化修饰,3端通常被甲基化等修饰,这进一步增加了piRNA的稳定性。Motif分析表明piRNA的第一个碱基通常是U,其他位置并没有碱基偏好性。
图6 piRNA生化分析
图7 piRNA的motif分析
免疫组化和Northern blot表明piRNA如同Ziwi一样在卵巢和睾丸中同样具有较高水平的表达。
图8 piRNA免疫组化
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