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Heler 说:“由于Cas9必须识别出PAM序列才会切割病毒DNA,在这一系统形成首次遭遇病毒的记忆时Cas9也就识别PAM序列对于我们来说很有意义。这是Cas9的一个意料之外的全新作用。”
为了检验他们的假说,Heler交换了化脓链球菌和嗜热链球菌免疫系统的Cas9酶,它们各自识别不同的PAM序列。结果,PAM序列跟随着在两种细菌之间发生了交换——表明在记忆形成中Cas9负责了PAM的识别。在另一个试验中,他改变了Cas9结合PAM序列的部分,发现这些微生物开始随机获得靶病毒序列,这使得它们变得不可用。
与此同时,Samai调查了Cas9与其他3种Cas酶:Cas1、Cas2和Csn2之间的关系。作为相同CRISPR系统的组件,研究人员怀疑这些酶在没有Cas9帮助的情况下在记忆形成中发挥了作用。
Samai让这些酶共同表达,随后标记每一个酶,并尝试提纯它。但每一次其他三种酶也一同出现。“这表明4种酶之间存在某种互作;最有可能的是它们在记忆获取过程中形成了复合物,”她说。
“由于Cas9具有靶向和切割病毒基因组的功能,它对生物技术非常重要,已吸引了人们极大的兴趣。我们的研究工作揭示出了Cas9一个遭到忽视的作用:形成了使得细菌适应性免疫成为可能的记忆,”Marraffini说
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