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重组蛋白复溶与保存如何操作?
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重组蛋白复溶与保存如何操作?

1)冻干粉在运输过程中,会因为外力的因素粘附于管壁或者管盖上面,在开盖之前,先通过离心操作,将冻干粉收集于管底,避免损失很浪费。开盖前快速离心10000-12000rpm,30s;若没有高速离心机,3000-3500rpm 离心5min。

2)离心之后,向冻干粉中加入提供的复溶Buffer,用枪头轻轻吹打混匀,重悬至浓度不低于100 μg/mL。注:分装冻存时,蛋白浓度不低于 100 ug/mL,且每管的体积不可小于20 μL。

3)用复溶Buffer直接溶解的细胞因子或重组蛋白液体可在 2-8℃ 最长保存1周。对于周期较短的实验,可以直接取该条件下保存的重组蛋白溶液加入到培养体系内即可,待一周之内用完。若要长期保存,则需用含载体蛋白 (0.1% BSA、5% HAS、10% FBS 或 5% 海藻糖) 的溶液进一步稀释,然后分装冻存 -20℃ 至 -80℃。

4)保存产品时请避免反复冻融。反复冻融,冰晶会破坏重组蛋白的空间结构,导致蛋白变性形成多聚体和重组蛋白构象改变,从而降低抗体的结合能力,也加快了蛋白的降解速度。

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提问者
西亚试剂问答
研晶
2025-09-06 14:55:03

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